一、动力学分析中，结合常数 Ka、解离常数 Kd、亲和力常数 KD 分别代表什么？
结合常数 Ka: 代表复合物（RL）的形成速率，在 1M 的 R 和 L 下，每秒产生的复合物数量。单位为 M-1S-1,一般从 103 到 107M-1S-1。
解离常数 Kd: 反应了复合物的稳定性，每秒钟解离的复合物的百分比。Kd=0.01S-1，即为每秒钟有1%的复合物解离，Kd 越大，解离越快。单位为 S-1，一般在 10-2 至 10-5S-1。
亲和力常数 KD: 反应了相互作用结合能力的大小，越小亲和力越高，Kd/Ka的比值，是平衡常数的倒数。单位为 M，检测范围为 mM~pM。
二、SPR 可研究的生物分子范围？
蛋白质、DNA/RNA、 脂类 /脂质体/ 生物膜、多糖、多肽、小分子、全细胞/病毒/微生物
钟鼎目前可以检测的亲和力范围：
① 亲和素-生物素结合: 10-14M;② 强的抗原-抗体结合：10-8 ~10-10 M;③ DNA 与蛋白的结合：10-8 ~10-10 M;④ 较弱的抗原-抗体结合：10-6 ~10-7 M;⑤ 蛋白与小分子结合：10-3 ~10-6 M。
三、SPR 的样品需要满足什么要求？
样品的均一性
蛋白理化性质
缓存液成分
亚型/标签类型
确保样品充分水溶，样品中没有任何沉淀、颗粒——保持样品处于均一的、不聚集的状态
纯度（>90%），蛋白浓度 >0.2mg/ml ，浓度越高越好；明确等电点/分子量信息
分析物样品中不能含有甘油、蔗糖、咪唑等高折光的成分；氨基偶联的配体溶液中不能含有tris、NaN3、甘氨酸等成分；小分子需要知道有机溶剂信息
如果配体或分析物是抗体，请告知抗体亚型及抗体种类；如果配体或分析物是蛋白，请告知标签类型
四、相比较 Octet，Biacore 检测具有哪些优势？
Biacore
Octet
原理
表面等离子共振Surface Plasmon Resonance(SPR)
生物层干涉Bio-Layer Interferometry (BLI)
信号读取
折光率
波长位移
温控范围
4-40℃
常温
进样方式
连续流动流体特性，分辨力更胜一筹，但是流路易堵塞，维护成本高
浸入式，维护成本低，但是样本易蒸发
分子量范围
无分子量检测下限
分子量检测下限 150Da
分析时间
1.5-2h/对
20min左右/对
通量
T200: 通量低 ; 8k: 高通量
相对通量较高
样品兼容性
对有机溶剂、折光性物质耐受性差
耐受性较好
分析成本
不可再生的方法做一个蛋白与多个抗体的模式成本占优势
可再生方法成本优势明显
分析上的优势
小分子检测更灵敏、准确
样本量大占优势；表位分析占优势
质控
QC 模块
无
法规收录
美国、日本药典、2020中国药典
2021年美国药典
五、SPR技术具有哪些特点？
（1）实时检测，能动态监测生物分子相互作用的全过程；（2）无需标记样品，保持了分子活性；（3）样品需要极少，一般一个表面仅需要 100μg 蛋白；（4）检测过程方便快捷，灵敏度高；（5）应用范围广泛；（6）高质量的分析数据。
六、SPR检测可提供的信息？
（1）有无结合 (Yes or No)；（2）结合的特异性和选择性 (Specificity)；（3）两种分子的结合强度——亲和力 (Affinity)；（4）结合和解离的快慢和复合体的稳定性——动力学 (Kinetics)；（5）分子结合的温度与热力学特征 (Thermodynamics)；（6）目标分子活性含量的检测 (Concentration)；（7）能跟踪监控固定的配体的稳定性。
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